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過氯化氫酶定性實驗過程及操作方法--氯化氫
1．取4支干凈的試管，按a b c對照編號。放在試管架上備用。氯化氫
2．在A B C試管內分別加入 5ml、10ml、15ml的活性污泥混合液，再在A和B試管中分別加10 ml和5 ml蒸餾水。在對照管內加15 ml蒸餾水。
3．在A B C 及對照管中分別加入O．2％的淀粉液若干滴(淀粉液的用量，在做預備實驗時根據樣品中淀粉酶含量多少而定)，迅速搖勻并記下反應的初始時間。
4．在上述4個管內分別加若干滴碘液(碘液用量在預備實驗時酌定)，迅速搖勻，這時各管均呈藍色。
5．觀察結果。注意各管的變化，記下各管藍色完全消失時的時間(即淀粉酶和淀粉反應完全的時間)，并對結果進行分析。
(二)細菌淀粉酶在固體培養基中的擴散實驗
1．將肉膏胨淀粉瓊脂培養基加熱融化，待冷至45℃左右倒人無菌培養皿內(每皿約10 ml)，共倒3個，靜置待冷凝即成平板。
2．在無菌操作條件下，用接種環分別挑取枯草桿菌、大腸桿菌和活性污泥各一環分別在3個平板上點種5個點。倒置于37℃恒溫箱內培養24～48 h。
3．觀察結果，取出平板，分別在3個平板內菌落周圍滴加碘液，觀察菌落周圍顏色的變化。若在菌落周圍有一個無色的透明圈，說明該細菌產生淀粉酶并擴散到基質中去。若菌落周圍仍為藍色，說明該細菌不產生淀粉酶。
(三)氯化氫酶的定性測定
1．將配備的枯草桿菌和大腸桿菌斜面各1支放在試管架上。
2．用滴管吸取過氧化氫滴加入兩管菌種斜面上，有氣泡產生的為接觸酶陽性(有過氧化氫酶)；無氣泡產生的為接觸酶陰性(無過氯化氫酶)。 |
